Фагоцитоз -- процесс, при котором специально предназначенные для этого клетки крови и тканей организма (фагоциты) захватывают и переваривают твердые частицы. Открытие фагоцитоза принадлежит И. И. Мечникову. Он осуществляется двумя разновидностями клеток: циркулирующими в крови зернистыми лейкоцитами (гранулоцитами) и тканевыми макрофагами. У животных фагоцитировать могут также ооциты, плацентные клетки, клетки, выстилающие полость тела, пигментный эпителий сетчатки глаза.
Механизм фагоцитоза однотипен и включает 8 последовательных фаз: 1) хемотаксис (направленное движение фагоцита к объекту);
2) адгезия (прикрепление к объекту);
3) активация мембраны (актин-миозиновой системы фагоцита);
4) начало собственно фагоцитоза, связанное с образованием вокруг поглощаемой частицы псевдоподий;
5) образование фагосомы (поглощаемая частица оказывается заключенной в вакуоль благодаря надвиганию на нее плазматической мембраны фагоцита подобно застежке-молнии;
6) слияние фагосомы с лизосомами;
7) уничтожение и переваривание;
8) выброс продуктов деградации из клетки.
Фагоцитозу часто предшествует процесс опсонизации (от греч. opsoniazo -- снабжать пищей, питать) объекта. Объектом является клетка, которая несет чужеродную информацию. Инициатором этого процесса является образование на поверхности клетки комплекса антиген-антитело. Антитела, локализуясь на поверхности чужеродной клетки, стимулируют активацию и присоединение к ним белков системы комплемента. Образующийся комплекс действует как активатор остальных стадий фагоцитоза.
Более детально этапы фагоцитоза выглядят следующим образом:
1. Хемотаксис. Чужеродные клетки (опсонизированные или неопсонизированные) посылают в окружающую среду хемотаксические сигналы, в направлении которых начинает двигаться фагоцит. Ранее других клеток в очаг воспаления мигрируют нейтрофилы, позже - макрофаги.
2. Адгезия фагоцитов к объекту. Обусловлена наличием на поверхности фагоцитов рецепторов для молекул, представленных на поверхности объекта (собственных или связавшихся с ним). Акт адгезии включает две фазы: распознавание чужеродного (специфический процесс) и прикрепление, или собственно адгезию (неспецифический процесс). В случае если отсутствует предварительное специфическое распознавание чужеродных клеток, адгезия фагоцитирующей клетки к объекту фагоцитоза происходит крайне медленно.
3. Активация мембраны. На этой стадии осуществляется подготовка объекта к погружению. Происходит активация протеинкиназы С, выход ионов кальция из внутриклеточных депо. Большое значение играют переходы золь-гель в системе клеточных коллоидов и актино-миозиновые перестройки.
4. Погружение. Происходит обволакивание объекта. В процессе фагоцитоза плазматическая мембрана макрофага при помощи образованных ею выступающих складок захватывает объект фагоцитоза и обволакивает его.
5. Образование фагосомы. Происходит замыкание мембраны, погружение объекта с частью мембраны фагоцита внутрь клетки. Образующаяся при этом небольшая вакуоль называется фагосомой.
6. Образование фаголизосомы. Слияние фагосомы с лизосомами, в результате чего образуются оптимальные условия для бактериолиза и расщепления убитой клетки.
7. Киллинг и расщепление. В фагосоме захваченная чужеродная клетка гибнет. Для осуществления киллинга макрофаг продуцирует и секретирует в фагосому реакционноспособные производные кислорода. Основные вещества, участвующие в бактериолизе: пероксид водорода, продукты азотного метаболизма, лизоцим и др. Процесс разрушения бактериальных клеток завершается благодаря активности протеаз, нуклеаз, липаз и других ферментов.
Переваривание захваченного и убитого материала - завершающий этап фагоцитоза. Для этого с фагосомой, содержащей объект фагоцитоза, объединяются лизосомы, которые содержат более 25 различных ферментов, в число которых входит большое количество гидролитических энзимов. В фагосоме происходит активация всех этих ферментов, так называемый метаболический взрыв, в результате которого фагоцитированный объект переваривается.
8. Выброс продуктов деградации.
Фагоцитоз может быть:
ѕ завершенным (киллинг и переваривание прошло успешно);
ѕ незавершенным (для ряда патогенов фагоцитоз является необходимой ступенью их жизненного цикла, например, у микобактерий и гонококков).
Изучение показателей фагоцитоза имеет значение в комплексном анализе и диагностике иммунодефицитных состояний: часто рецидивирующих гнойно-воспалительных процессах, длительно не заживающих ран, склонности к послеоперационным осложнениям.
Для исследования фагоцитарной функции используют:
ѕ подсчет абсолютного числа фагоцитов (нейтрофилов и моноцитов);
ѕ оценку интенсивности поглощения микробов фагоцитами;
ѕ определение способности фагоцитирующих клеток переваривать захваченные микробы.
Наиболее информативным для оценки активности фагоцитоза считают фагоцитарное число, количество активных фагоцитов и индекс завершенности фагоцитоза.
Наиболее распространенным методом количественного определения и характеристики морфологических дефектов нейтрофилов является лейкограмма и цитологические исследования с использованием световой и электронной микроскопии.
Для определения хемотаксической активности нейтрофилов применяют метод исследования миграции лейкоцитов с использованием камеры Бойдена. Метод основан на разделении микропористым фильтром в растворе двух реагирующих компонентов: нейтрофилов и хемотаксических агентов (например, C5a), которые помещаются в нижнюю камеру и создают концентрационный градиент. Помещенные в верхнюю камеру нейтрофилы мигрируют вдоль градиента и собираются на нижней поверхности фильтра. После стандартной инкубации фильтры извлекают, окрашивают и подсчитывают количество клеток. Метод довольно прост и отличается весьма высокой воспроизводимостью. Этот же принцип лежит в основе метода клеточной миграции под агарозным гелем, который используется для определения хемотаксического индекса.
Для фагоцитарного числа норма -- 5-10 микробных частиц. Это среднее количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом крови. Характеризует поглотительную способность нейтрофилов. Определяется путем подсчета количества поглощенных бактерий одной клеткой после инкубации клеток пациента со стандартными препаратами St.aureus или E.coli и окраски полученных мазков. Модификацией этого теста является метод определения бактерицидной активности, при котором отмытая суспензия клеток инкубируется с бактериальной суспензией, затем смесь наносится на поверхность кровяного агара и через определенное время подсчитывается количество выросших бактериальных колоний. Оба метода требуют стандартизации для использования в каждой конкретной лаборатории и сведений об антибиотикотерапии, которая может быть причиной недостоверных результатов или ошибок в их интерпретации.
Фагоцитарная емкость крови в норме -- 12,5-25х10 9 на 1 л крови. Это количество микробов, которое могут поглотить нейтрофилы 1 л крови.
Фагоцитарный показатель в норме 65-95%. Это относительное количество нейтрофилов (выраженное в процентах), участвующих в фагоцитозе.
Количество активных фагоцитов в норме -- 1,6-5,0х10 9 в 1 л крови. Это абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов в 1 л крови.
Индекс завершенности фагоцитоза в норме -- более 1. Он отражает переваривающую способность фагоцитов.
Фагоцитарная активность нейтрофилов обычно повышается в начале развития воспалительного процесса. Ее снижение ведет к хронизации воспалительного процесса и поддержанию аутоиммунного процесса, так как при этом нарушается функция разрушения и выведения иммунных комплексов из организма.
Спонтанный тест с НСТ(нитросиний тетразолий) - в норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет до 10%. Этот тест позволяет оценить состояние кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов (гранулоцитов) крови in vitro. Он характеризует состояние и степень активации внутриклеточной НАДФ-Н-оксидазной антибактериальной системы. Феномен респираторного (или метаболического) взрыва связан со значительным увеличением кислорода, поглощаемого лейкоцитами при фагоцитозе, в результате чего происходит образование супероксидного радикала (О 3-) и перекиси водорода. Все эти соединения обладают микробоцидными свойствами, и их идентификация представляет собой важный этап в оценке функциональной активности фагоцитарных клеток.
Показатели НСТ-теста повышаются в начальный период острых бактериальных инфекций, тогда как при подостром и хроническом течении инфекционного процесса они снижаются.
Снижение спонтанного теста с НСТ характерно для хронизации воспалительного процесса, врожденных дефектов фагоцитарной системы, иммунодефицитов, злокачественных новообразований, тяжелых ожогов, травм, недостаточности питания, лечения некоторыми лекарственными препаратами, воздействия ионизирующего излучения.
Повышение спонтанного теста с НСТ отмечают при антигенном раздражении вследствие острого бактериального воспаления, лейкоцитозе, усилении антителозависимой цитотоксичности фагоцитов, аутоаллергических заболеваниях, аллергии.
Активированный тест с НСТ используется для определения фагоцитарной метаболической (кислородо-зависимой) активности нейтрофилов. Тест включает в себя инкубацию нейтрофилов с НСТ in vitro, и по формированию нерастворимых окрашенных зерен формазана можно судить о восстановлении НСТ супероксидным радикалом, образующимся при активации фагоцитов. Отсутствие осадка свидетельствует о неспособности клеточной популяции фагоцитов к метаболизму.
В норме у взрослого человека количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет 40-80%. Снижение показателей активированного НСТ-теста нейтрофилов ниже 40% и моноцитов ниже 87% свидетельствует о недостаточности фагоцитоза.
Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов – анализ крови, который направлен на определение резервных возможностей нейтрофилов и моноцитов к выполнению их основной функции – поглощению и переработке чужеродных агентов. Тест выполняется в комплексе иммунограммы. Он показан пациентам с рецидивирующими и хроническими инфекциями, приобретенными и генетическими иммунодефицитными состояниями, аутоиммунными и онкологическими заболеваниями, перенесшим сложные операции, в том числе по трансплантации органов. Анализу подвергается цельная кровь. Исследование основано на оценке фагоцитоза бактерий с флуоресцентными метками. В норме фагоцитирующие гранулоциты составляют от 82 до 90% от общего количества, фагоцитирующие моноциты – от 75 до 85%. Готовность результатов – до 8 дней.
Фагоцитарная активность лейкоцитов – лабораторный показатель, который отражает процент нейтрофилов и моноцитов, способных к связыванию с патогенной микрофлорой и ее перевариванию. Фагоциты – клетки, которые защищают организм от развития инфекций. Они считаются компонентом врожденного иммунитета, в крови представлены двумя видами лейкоцитов – моноцитами и нейтрофилами. Моноциты являются крупными клетками – макрофагами. Они обладают выраженной способностью к поглощению, перерабатывают большие по размерам клетки и органические соединения. В месте воспаления они фагоцитируют бактерии, лейкоцитарную массу, пораженные клетки. В результате ткани очищаются и подготавливаются к регенерации. Нейтрофилы относятся к микрофагам, в отличие от моноцитов поглощают только небольшие клетки и органические компоненты. После переработки агентов нейтрофилы гибнут, высвобождают вещества, которые повреждают бактерии и грибки, усиливают приток иммунных клеток к очагу воспаления.
Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов позволяет оценить резерв моноцитов и нейтрофилов к перевариванию чужеродных агентов. Изменение характеристик фагоцитов отражает не только иммунологическую реактивность организма, но и особенности некоторых других процессов – белкового и углеводного обмена, наличие интоксикации и истощения организма, активность восстановления после заболеваний и т. д. Таки образом, анализ применяется не только в иммунологии и инфекционистике, но и в ревматологии, онкологии, хирургии. Результаты исследования отображаются как процент активных фагоцитов к их общему количеству. Выявление активных нейтрофилов и моноцитов производится с помощью бактерий с флуоресцентными метками. Биоматериалом для исследования является цельная кровь с гепарином.
Показания
Исследование фагоцитарной активности лейкоцитов показано при подозрении на врожденный или приобретенный иммунодефицит. Оно назначается при затяжных, хронических и рецидивирующих инфекционных заболеваниях – характерном признаке снижения иммунитета. Чаще всего на анализ направляются пациенты с пневмонией, синуситом, отитом, энтероколитом, кандидозом, циститом. Также о недостаточности иммунной защиты могут свидетельствовать длительно незаживающие раны, осложнения после операций. Поэтому анализ выполняется при подготовке к хирургическому вмешательству и при осложненном течении послеоперационного периода, при длительном восстановлении после травм и ожогов. К другим показаниям для данного исследования относятся аллергические, аутоиммунные и онкологические заболевания. Результаты позволяют оценить активность иммунной защиты (фагоцитоза) и ее роль в развитии болезни.
Анализ крови на фагоцитарную активность лейкоцитов дает возможность определить фактическую готовность организма к противостоянию инфекциям. Однако стоит помнить, что этот показатель изменяется под влиянием многих факторов. Так, активность моноцитов и нейтрофилов снижается после физической нагрузки и при умственном утомлении, а после приема калорийной пищи повышается. Еще одним ограничением анализа является то, что процедура исследования занимает до 8 рабочих дней, полученные результаты отражают состояние недельной давности.
Подготовка к анализу и забор материала
Для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов производится забор крови из вены. За день до анализа нужно исключить из рациона алкоголь, отменить спортивные тренировки и другие интенсивные физические нагрузки, избегать стрессовых ситуаций. Также необходимо проконсультироваться с врачом о влиянии принимаемых лекарств на результат исследования, возможно, некоторые препараты будут временно отменены. Процедура забора крови, как правило, производится с утра, после ночного периода голодания или через 4 часа после приема пищи.
Кровь берется из локтевой вены с помощью пункции, для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов чаще всего используется метод оценки фагоцитоза бактерий с флуоресцентной меткой. Из крови путем центрифугирования и отмывания выделяют моноциты и нейтрофилы – исследуемый материал. Затем в образец вводят культуру люминесцентных бактерий, смесь ресуспендируют и инкубируют, по интенсивности люминесценции определяют количество лейкоцитов, фагоцитировавших бактерии. Результаты анализа подготавливаются в течение 7-8 рабочих дней. Фагоцитарная активность моноцитов и нейтрофилов может быть определена и другими методами, например, окрашиванием фагоцитировавших клеток (метод Романовского-Гимзы), по активности лизосомальных ферментов, производству цитокинов, присутствию катионных белков.
Нормальные значения
Результат анализа крови на фагоцитарную активность лейкоцитов выражается в процентах фагоцитирующих клеток от их общего количества. Значения нормы для гранулоцитов – от 82 до 90%, для моноцитов – от 75 до 85%. Эти показатели одинаковы для пациентов всех возрастов и обоих полов. Физиологическое снижение фагоцитоза может определяться во время беременности, после физической нагрузки, не соответствующей уровню подготовки, и после эмоционального стресса.
Повышение и снижение показателя
Повышение фагоцитарной активности лейкоцитов не имеет диагностической значимости, причиной могут стать острые инфекции. Активность моноцитов и нейтрофилов увеличивается относительно исходного уровня.
Анализ фагоцитарной активности лейкоцитов относится к иммунологическим методам исследования. Его показатели позволяют определить резервные способности клеток крови к поглощению и перевариванию инфекционных агентов, то есть готовность организма противостоять развитию заболевания. Если результаты анализа ниже нормы, необходимо проконсультироваться с лечащим врачом – иммунологом, инфекционистом, хирургом, ревматологом, онкологом. Физиологическое снижение показателей можно скорректировать правильным подбором физической нагрузки, профилактикой стресса.
www.krasotaimedicina.ru
Врач иммунолог-аллерголог Болибок Владимир Анатольевич
Антитела или иммуноглобулины. Иммуноглобулины представляют собой достаточно крупные и сложные молекулы белков, которые синтезируются клетками иммунной системы – плазматическими клетками. В свою очередь, плазматические клетки происходят из B-лимфоцитов. Иммуноглобулины обладают свойством связываться с чужеродными молекулами (белками, липопротеидами), находящимися как в растворенном состоянии, так и на поверхности вирусов, бактерий и т.п. Чужеродные молекулы могут находится и на мембране своих собственных клеток, если эти клетки инфицированы вирусами или мутировали. Антитела сами по себе не могут убить вирус, бактерию или клетку, или химически разрушить токсин, который выделяется бактериями. Но они могут, во-первых, их нейтрализовать, нарушить функцию или снять токсичность; во-вторых, «указывают» иммунной системе на «чужака», которого следует уничтожить. После того, как антитела прореагировали с чужеродными молекулами на поверхности вирусов, бактерий и др. объектов, в бой с ними вступают белки системы комплемента, цитотоксические Т-лимфоциты или клетки-фагоциты (нейтрофилы и моноциты-макрофаги). При этом связывание антител очень избирательно – один вид антител реагирует только с той чужеродной молекулой, против которой он вырабатывается. Это свойство называется специфичностью антител. К примеру, антитела против вируса кори не реагируют с вирусом ветряной оспы, и наоборот.
По химическому строению иммуноглобулины делятся на 5 классов:
Иммуноглобулины класса G. Это основной класс защитных антител, составляет более 80% всех антител, циркулирующих в крови и во внутренней среде организма. Иммуноглобулины класса G начинают вырабатываться примерно через 7 – 10 дней после первого контакта с незнакомой инфекцией и их уровень нарастает до максимума примерно на 30 – 40 день. Иммуноглобулины класса G долго сохраняются в крови, иногда их синтез продолжается годами и десятилетиями, и как раз они обеспечивают приобретенный иммунитет к большинству инфекций, как после заболевания, так и после вакцинации. Иммуноглобулины класса G могут проникать через плаценту к развивающемуся ребенку и накапливаться в крови ребенка перед рождением. В этом имеется глубокий смысл, т.к. ребенок с материнскими антителами приобретает и иммунитет против тех инфекций, с которыми контактирует мать в своем обычном окружении.
Иммуноглобулины класса M. Это наиболее крупные антитела, и они вырабатываются в первую очередь при контакте с незнакомой инфекцией. Иммуноглобулины класса M появляются в течение первых суток от начала инфекции, заметный уровень создается уже к 3 – 4 дню, максимум – на 7 – 10 день, и затем, после уничтожения инфекции в организме, они быстро исчезают – примерно через 4 – 6 недель. Иммуноглобулины класса M не проникают через плаценту.
Иммуноглобулины класса A. Эти так называемые секреторные антитела. Они выделяются со слизью через слизистые оболочки в дыхательные пути, по ходу желудочно-кишечного тракта, со слезной жидкостью на конъюктивы, с потом и салом на кожу. Основное предназначение иммуноглобулинов класса A – уничтожать и блокировать инфекцию до того, как она сможет проконтактировать с покровными тканями организма и препятствовать внедрению инфекции внутрь организма. Иммуноглобулины класса A не проходят через плаценту. Иммуноглобулины класса A в значительных количествах выделяются через молочные железы с грудным молоком (особенно высокая концентрация IgA в молозиве), и предохраняют слизистые оболочки новорожденного и грудного ребенка от инфекции.
Иммуноглобулины класса D. Концентрация этих антител в крови также очень низкая – менее 1%. Иммуноглобулины класса D, в отличие от остальных классов иммуноглобулинов, синтезируются не плазматическими клетками, а самими лимфоцитами, и представляют собой слущенные рецепторы с поверхности наружной мембраны лимфоцитов, по сути дела – это обломки мембраны погибших лимфоцитов. Клиническое значение этих иммуноглобулинов до настоящего времени не выяснено, поэтому их уровень обычно не проверяют.
Белки системы комплемента.
Антитела или иммуноглобулины, как сказано выше, способны связываться с вирусами и бактериями, но не способны их убивать. Способность убивать бактерии, грибки и другие клетки есть у белков системы комплемента. В системе комплемента насчитывают 9 основных и 2 дополнительных белка, все они находятся в крови и готовы немедленно вслед за антителами атаковать «чужаков». Эти белки относятся к белкам-ферментам, а именно – к протеазам. Белки системы комплемента способны, взаимодействуя между собой, собираться в своеобразную «трубочку» или «иглу», которая протыкает оболочку вируса, микроба или собственной инфицированной или ставшей чужеродной клетки именно в том месте, где прореагировали антитела. Эта «игла» носит название «мембранно-атакующий комплекс». В результате в оболочке клетки образуется дырка. С учетом того, что с микробом может одновременно прореагировать свыше 10000 молекул антител, в нем одновременно образуется такое же количество «дырок» от белков. Под электронным микроскопом поверхность клетки, которую атакуют антитела с комплементом, выглядит как лунный пейзаж, изрытый кратерами от метеоритов. Поскольку концентрация солей внутри микробной клетки выше, чем снаружи, вода через поры в мембране устремляется внутрь микробной клетки и микроб в буквальном смысле лопается, раздутый водой. Происходит лизис микроба, а его останки поедают фагоциты.
Комплемент – это оружие «быстрого реагирования». Белки системы комплемента вступают в реакцию немедленно, как только антитела обнаружат чужака. Это важно для защиты от инфекции в ранах – если активность комплемента в организме высока, то инфекция, попавшая в рану, будет уничтожена практически моментально, и рана (защищенная от дальнейшего инфицирования струпом из свернувшейся крови) не нагноится.
Лизоцим.
В организме вырабатываются специальные ферменты, способные растворять оболочку бактерий, из них самый изученный – лизоцим (мурамилпептидаза). При растворении оболочки лизоцимом микроб теряет свои патогенные свойства, не может дальше инфицировать организм и становится более легкой мишенью для антител и комплемента и более легкой «пищей» для фагоцитов.
Интерфероны.
Это особая группа белков, которую вырабатываются как клетками иммунной системы (лейкоцитами), так и другими клетками организма, чаще всего эпителиальными, если они инфицированы каким-либо вирусом. Интерфероны предохраняют любые другие клетки организма от инфицирования вирусом. Иначе любая вирусная инфекция приводила бы к тому, что инфицированными становились все клетки организма.
C-реактивный белок.
Этот белок присутствует в крови в очень незначительном количестве, но его количество увеличивается в десятки и сотни раз при появлении очага бактериального воспаления. Поэтому С-реактивный белок (читается Ц) относится к белкам «острой фазы». СРБ способен связывать и «склеивать» между собой оболочки бактерий: в процессе размножения микробы остаются склеенными между собой и образуют большой конгломерат из микробных клеток. Во-первых, это не дает микробам разноситься с током крови и лимфы по организму. Во-вторых, внутри такой «колонии» микробы не получают достаточного количества питательных веществ и их рост и размножение замедляется или останавливается вовсе. В-третьих, на налипший на оболочке микробов С-реактивный белок фагоциты реагируют повышенной активностью и начинают поглощать эти микробы с большей жадностью.
doctor-bolibok.narod.ru
Фагоцитарная активность нейтрофилов
Фагоцитарную функцию клеток периферической крови принято оценивать по проценту фагоцитирующих нейтрофилов, фагоцитарному числу (среднее число микроорганизмов, захваченных одним гранулоцитом) и абсолютному фагоцитарному показателю, который является отвлеченной величиной, полученной в результате умножения фагоцитарного числа на количество нейтрофилов, фагоцитирующих в 1 мм3 крови. Иными словами, абсолютный фагоцитарный показатель - это число микробов, которые способны поглотить нейтрофилы, содержащиеся в 1 мм3 крови. При постановке реакций фагоцитоза используют взвесь убитых микроорганизмов и кровь больного. После инкубации крови и бактерий в термостате готовят мазки, окрашивают их и оценивают поглотительную способность гранулоцитов.
Для постановки реакции фагоцитоза используют также взвесь живых микроорганизмов. В этих случаях фагоцитарная активность гранулоцитов будет в 2 - 2;5 раза ниже, чем в реакциях с убитыми бактериями. Розеткообразующие свойства нейтрофилов. В последние годы выяснено, что нейтрофилы человека имеют на поверхности своей мембраны рецепторы к ряду компонентов комплемента и Fc-фрагментам иммуноглобулинов. Установлено также наличие на мембране нейтрофилов рецепторов к эритроцитам барана.
Как и лимфоциты, нейтрофилы могут быть разделены на популяции по их способности к спонтанному розеткообразованию с эритроцитами барана и к комплементарному розеткообразованию с аллогенными эритроцитами в присутствии комплемента и иммуноглобулинов.
Постановка реакций спонтанного и комплементарного розеткообразования нейтрофилов аналогична постановке реакций спонтанного и комплементарного розеткообразования лимфоцитов. Комплементарная активность сыворотки крови. Компоненты комплемента биологически инертны, но при активации комплексом антиген - антитело приобретают свойства энзимов и играют выраженную (защитную или деструктивную) роль в иммунном цитолизе. Помимо цитолиза, комплемент непосредственно участвует в различных проявлениях неспецифической защиты организма и главным образом в различных фазах воспалительной реакции, как клеточной, так и гуморальной.
Среди этих проявлений наиболее изучена активность комплемента, приводящая к высвобождению гистамина и повышению проницаемости капилляров, управляющая хемотаксисом и повышающая фагоцитирующую способность нейтрофильных гранулоцитов, способствующая иммунному прилипанию и опсонизации фагоцитирующих частиц, нарушению клеточной стенки и т. д.
Повышая проницаемость мелких кровеносных сосудов, комплемент, по-видимому, участвует в управлении миграцией гранулоцитов.
Система комплемента представлена белковыми молекулами, которые локализуются в альфа- и бета-глобулиновых фракциях и состоит из 11 белков сыворотки крови, составляющих 9 компонентов.
Для активации системы комплемента необходимы специальные субстанции, в результате воздействия которых компоненты комплемента активируют один другого в строгой последовательности (каскадное или секвенциальное включение) двумя путями - классическим и альтернативным (или пропердиновым).
Активация по классическому пути вызывается комплексом антиген - антитело, агрегированным иммуноглобулинами классов G и М, или комплексами полианион - поликатион, таким, например, как гепарин-протаминовый комплекс. При этом первый компонент комплемента (С1) образует С1-эстеразу, которая расщепляет четвертый (С4) и второй (С2) компоненты комплемента, способствуя образованию СЗ-конвертазы классического пути.
Альтернативный путь активации комплемента является эволюционно более древним. Он наиболее важен в антибактериальном защитном механизме до того, как начнут вырабатываться специфические антитела. Активация по альтернативному пути вызывается агрегированными иммуноглобулинами классов А и Е, растворимыми и нерастворимыми полисахаридами оболочек бактерий и не требует наличия С1-, С4- и С2-компонентов комплемента.
В первой стадии на поверхности активатора образуется энзим как результат взаимодействия факторов компонента СЗ. Энзим очень лабилен, но способен расщеплять СЗ и таким образом способствовать образованию более эффективной СЗ-конвертазы. Образование СЗ-конвертазы и расщепление под ее влиянием третьего компонента комплемента являются узловыми моментами обоих путей активации.
На этой стадии происходят комплементзависимые клеточные взаимодействия. Так называемые комплементарные мосты принимают участие в индукции иммунных ответов, элиминации иммунных комплексов и контроле бактериальных инфекций. Образование таких мостов длительное время было известно как иммунное прилипание.
Этот феномен используется в тесте комплементарного розеткообразования. Оба пути активации комплемента ведут к генерации биологически активных фрагментов компонентов комплемента. Так, система комплемента активируется агентами, постоянно присутствующими в нормально функционирующем организме.
В процессе эволюции развились и механизмы контроля ее активации. Существуют два основных механизма регуляции активации комплемента. Первый присущ самой системе и заключается в лабильности СЗ-конвертазы обоих путей, что лимитирует активацию последующих компонентов комплемента, участвующих в каскадном включении активации (С5 - С9).
Второй осуществляется специальными природными белками-ингибиторами. Из них наиболее важны С1-ингибитор, который образует комплекс с фрагментом С2, не давая ему дальше расщеплять С4 и С2, и таким образом контролирует сборку СЗ-конвертазы классического пути, и СЗ-инактиватор, который служит основным контрольным белком системы комплемента, расщепляя СЗ в жидкой фазе на два гемолитически неактивных белка.
Имеются данные об изменениях в системе комплемента при различных патологических состояниях. Так, Kassel (1977) у более чем 5000 больных раком различной локализации установил дефицит комплемента и его компонентов.
Отдельные компоненты сывороточного комплемента обычно определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини с использованием моноспецифических антисывороток к тому или иному компоненту. Активность комплемента оценивают также по его способности лизировать эритроциты в присутствии антител против них.
За единицу гемолитической активности комплемента принимают активность, необходимую для лизиса 50% эритроцитов в присутствии антител. Используя метод кинетического титрования, реакцию можно записать во времени. Эта реакция качественная и не дает представления о концентрациях комплемента и его компонентов.
«Коррекция иммунитета у больных раком
предстательной железы», В.А.Савинов
www.medchitalka.ru
Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови у разных видов животных
ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ РАСЦЕНОК НА ВЕТЕРИНАРНЫЕ УСЛУГИ ПРИ ОБСЛУЖИВАНИИ МЕЛКИХ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ
Трофимова Е.Н.
Учет особенностей формирования расценок на ветеринарные услуги при обслуживании мелких домашних животных обеспечивает установление научно - обоснованных расценок, которые используются в ветеринарной практике.
FEATURES OF FORMATION OF QUOTATIONS ON VETERINARY SERVICES AT
SERVICE OF SMALL PETS
The account of features of formation of quotations on veterinary services at service of small pets provides an establishment scientifically - well-founded quotations which are used in veterinary practice.
УДК 619:616 - 002.5
ФАГОЦИТАРНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У РАЗНЫХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ
Трубкин А.И., Харитонов М.В.
ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
Ключевые слова: микобактерия, штамм, фагоцитарная активность.
Key words: mycobacterium, strain, phagocytic activity.
Кровь является одним из наиболее тонких и чувствительных показателей, указывающих на функциональное состояние организма, отображающих картину борьбы его с внедрившимися микроорганизмами, гельминтами и его реактивную способность. Разработанная И.И. Мечниковым теория защитной роли фагоцитов в борьбе организма с внедрившемся в его ткани патогенными микробами явилась первым шагом к построению теории противоинфекционного иммунитета. По данным литературных источников, фагоцитоз при туберкулезной инфекции имеет неспецифический защитный характер. Однако имеется ряд наблюдений, которые свидетельствуют о том, что некоторая степень специфичности в фагоцитарных реакциях при туберкулезе все-таки имеется. Например,
А.Д. Тимофеевский, С.В. Белеволенская (1927), Г.Д. Белановский (1928) показали, что фагоцитирующие клетки перитониального экссудата, периферической крови, селезенки и легкого, иммунизированных и естественно резистентных животных не разрушаются в присутствии вирулентных микобактерий, а наоборот, подавляют их размножение.
Еще более сложным является вопрос о судьбе самих туберкулезных микобактерий, проникающих в организм, и той реакции, которую они вызывают в органах. По литературным источникам (А.С. Рабухин, 1941; Ю.А. Лебедева, С.М. Сажина, 1913 и др.) в присутствии вирулентной туберкулезной культуры сначала происходит нейтрофильный лейкоцитоз и фагоцитоз туберкулезных микобактерий нейтрофильными лейкоцитами, затем - некроз лейкоцитов, наполненных возбудителем. При этом лейкоциты от больных неспецифическими заболеваниями легких, с ограниченной формой туберкулеза, в случаях инфицирования малыми дозами туберкулезных палочек происходит усиленный переход их в лимфобласты. В то же время лейкоциты страдающих хроническими или острым течением туберкулеза подвергаются быстрому распаду.
В связи с этим, определенный интерес вызывало сравнительное изучение фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови у разных видов животных, в том числе у морских свинок и кроликов.
Материалы и методы. Использовали лейкоциты периферической крови здоровых животных: крупный рогаты скот, лошади, овцы, козы, собаки, кролика, морской свинки, белой крысы.
Чтобы кровь не свернулась ее гепаринизировали из расчета 4 ед. инъекционного гепарина на 1 мл крови. После предварительного перемешивания, пробирки с кровью в течение 1 часа оставляли под углом 100 при комнатной температуре. Затем пробирки ставили под углом 450 в течение 15-20 мин. при этом необходимое количество лейкоцитов для постановки опытов накапливается между эритроцитами и плазмой крови в виде тумана. Накопившиеся лейкоциты отсасывали и вносили во флаконы с содержанием по 5 мл среды 199. После легкого перемешивания полученной смеси, во флаконы вносили M. bovis штамма N14 культуры микобактерий по стандартной мутности 1 мг в 1 мл физиологического раствора.
Флаконы закрывали резиновой пробкой и после легкого перемешивания в вертикальном положении поместили в термостат при температуре 370С.
Вначале через каждые 15 мин. (15,30,45,60,75,90,105,120мин), а затем через3,4,5,6,24,48 и 72 ч. с момента инкубации делали мазки при помощи специально изготовленного для этой цели стекла под углом 200. Мазки фиксировали в насыщенном растворе двухлористой ртути 2-3 мин. и окрашивали карболовым фуксином Циля, обесцвечивали 2,5% - ным раствором серной кислоты. Для растворения эритроцитов дополнительно
обрабатывали раствором уксусной кислоты и дополнительной окраске 0,5% - ным раствором метиленовой синьки, смешанной с 0,5% - ным раствором соды.
Подсчитывали 100 полиморфно ядерных лейкоцитов, по 50 единиц с каждого края мазка, и выводили фагоцитарную активность лейкоцитов в процентах.
Фагоцитарный показатель определили следующим образом, подсчитывали количество фагоцитированных туберкулезных палочек в 100 лейкоцитах и полученное число делили на количество просмотренных лейкоцитов.
Результаты исследований. Изучение фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови у разных видов животных по отношению к вирулентным культурам микобактерий туберкулеза бычьего вида показало, что в первые 15 мин. после контакта лейкоцитов происходит накопление микробных тел вокруг фагоцитируемых клеток крови (аттракция), но при этом еще не наблюдали поглощение микробных тел. Через 30 мин., после введения микобактерий обнаруживалось повышение фагоцитарной активности лейкоцитов по отношению к микобактериям у всех видов животных. Как видно из таблицы 1, в первые 30 мин. значительную фагоцитарную активность проявляют лейкоциты белой крысы (9,2±2,03%; Р
У продуктивных животных высокая фагоцитарная активность лейкоцитов наблюдалась у козы 6,2±2,10% (Р
Одновременно с фагоцитарной активностью лейкоцитов был изучен фагоцитарный показатель, - количество фагоцированных микробов в 100 лейкоцитах. Данные, показывающие среднее число поглощенных микобактерий на один фагоцит представлены в таблице 2. причем, для учета интенсивности фагоцитоза все фагоцитировавшие лейкоциты разбивали на три группы: в первую входили клетки, содержащие от 1 до 10 микобактерий; в нашем случае такие клетки составляли 80%; во вторую -от10 до 20, такие клетки, составляли 15%; в третью - свыше 20 микобактерий, такие клетки составляли 5%, из всех подсчитанных клеток.
Как видно из таблицы, первоначальный фагоцитарный показатель в отношении вирулентной культуры микобактерий бычьего вида у всех животных был ниже единицы.
* 15 30 45 60 75 90 105 120 3 ч. 4 ч. 5 ч. 6 ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.
1. Лошадь 3 6,8 ± 1,62 3,5 ± 0,95 4,3 ± 1,10 5,8 ± 1,31 6,4 ± 1,68 8,7 ± 1,62 10,0 ± 2,71 18,5 ± 4,00 25,0 ± 3,10 28,6 ± 3,80 30,0 ± 3,22 39,0 ± 3,50 43,9 ± 7,72 48,4 ± 6,20 48,7 ± 5,20
2. Кр. рог. скот 3 5,0 ± 1,03 3,4 ± 0,93 4,8 ± 1,19 5,8 ± 1,14 5,8 ± 1,39 7,4 ± 2,31 12,2 ± 2,96 19,0 ± 3,43 26,1 ± 3,31 27,6 ± 5,19 38,8 ± 6,05 40,0 ± 6,15 41,6 ± 8,07 43,0 ± 8,11 43,2 ± 5,08
3. Овца 3 5,6 ± 1,11 0,05 4,8 ± 1,05 0,05 6,2 ± 1,21 9,2 ± 2,05 12,4 ± 3,63 15,8 ± 2,33 19,8 ± 2,91 24,2 ± 3,81 30,0 ± 4,01 33,8 ± 4,17 38,8 ± 5,26 40,0 ± 4,15 44,8 ± 5,17 49,6 ± 5,09 51,8 ± 7,11
4. Коза 3 6,4 ± 2,09 6,2 ± 2,10 7,8 ± 2,20 9,2 ± 2,81 11,0 ± 2,33 19,4 ± 3,17 23,0 ± 3,19 25,4 ± 4,21 35,8 ± 6,15 37,0 ± 5,11 40,0 ± 5,08 44,4 ± 5,19 52,0 ± 7,01 55,6 ± 7,12 60,4 ± 7,07
5. Собака 3 6,6 ± 1,15 7,8 ± 2,03 9,2 ± 2,97 12,0 ± 3,53 12,8 ± 3,31 19,8 ± 3,03 26,1 ± 3,95 31,0 ± 3,91 38,4 ± 5,05 38,2 ± 4,17 40,4 ± 6,09 43,2 ± 6,12 49,5 ± 7,05 55,8 ± 8,11 67,0 ± 8,19
6. Кролик 3 4,3 ± 1,90 2,8 ± 0,9 3.1 ± 1.01 3,8 ± 1,56 3,9 ± 1,65 5,0 ± 1,68 5,4 ± 1,35 7,4 ± 2,06 7,8 ± 2,11 9,0 ± 2,19 12,6 ± 2,51 17,8 ± 3,19 0,05 24,4 ± 4,11 0,05 27,0 ± 4,92 31,0 ± 5,15 0,05
7. М. свинка 3 2,6 ± 1,07 1,2 ± 0,32 1,5 ± 0,95 2,0 ± 1,04 2,2 ± 1,00 2,8 ± 1,04 3,4 ± 1,17 3,8 ± 1,23 4,1 ± 1,92 5.0 ± 2.00 5,6 ± 1,92 6.3 ± 2.03 11,8 ± 3,09 13,2 ± 3,19 17,2 ± 4,05
8. Белая крыса 3 8,1 ± 1,35 9.2 ± 2.03 13,0± 2,20 19,6 ± 3,35 27,6 ± 5,49 31,6 ± 5,82 37,4 ± 6,05 43,8 ± 6,11 56,6 ± 7,14 59,8 ± 8,07 65,0 ± 8,15 72,3 ± 8,03 84,4 ± 8,15 87,0 ± 9,07 87,6 ± 9,19
* - аттракция микобактерий на поверхности лейкоцитов
№ п/п Вид животных после контакта с возбудителем через:
15 30 45 60 75 90 105 120 3 ч. 4 ч. 4 ч 5 ч. 6 ч. 24 ч. 48 ч. 72 ч.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
1. Лошадь 3 - 0,9 ± 0,03 1,78 ± 0,86 2,82 ± 1,25 3,13 ± 1,08 3,3 ± 1,01 3.9 ± 1.10 4,07 ± 1,51 5,32 ± 1,58 5,4 ± 1,96 5,95 ± 1,05 5,96 ± 1,14 6,8 ± 1,6 8,1 ± 2,90 8,2 ± 1,70
2. Кр. рог. скот 3 - 0,9 ± 0,02 1,5 ± 0,51 2,0 ± 0,52 2,2 ± 0,91 2,8 ± 0,85 3,1 ± 1,05 3,6 ± 1,21 4,0 ± 1,65 4,8 ± 1,12 5,2 ± 2,01 5,6 ± 2,12 5,4 ± 1,36 5,6 ± 2,05 5,6 ± 2,17
3. Овца 3 - 0,8 ± 0,02 1,8 ± 0,30 2,3 ± 0,15 2,8 ± 0,65 3,3 ± 1,02 4,4 ± 1,65 5,8 ± 2,01 5,8 ± 2,11 6,4 ± 3,03 6,0 ± 3,05 6,2 ± 3,18 6,0 ± 2,31 6,8 ± 2,15 6,8 ± 3,11
4. Коза 3 - 0,8 ± 0,11 1,7 ± 0,20 2,1 ± 0,80 2,3 ± 0,7 3,8 ± 1,05 4,0 ± 2,11 4,4 ± 2,01 5,1 ± 2,03 6,4 ± 2,11 6,8 ± 2,19 6,8 ± 2,35 7,6 ± 3,05 7,8 ± 3,12 7,8 ± 3,11
5. Собака 3 0,2 ± 0,01 0,8 ± 0,05 1,7 ± 0,15 2,3 ± 0,17 3,01 ± 1,01 4,5 ± 1,17 5,9 ± 1,19 6.5 ± 2.05 7,2 ± 2,01 7,5 ± 2,10 7,8 ± 2,05 8,7 ± 3,15 9.5 ± 3.05 9,9 ± 3,41 10,1± 3,11
6. Кролик 3 0,3 ± 0,02 1,9 ± 0,3 1,9 ± 0,61 1,3 ± 0,85 2,0 ± 0,90 2,1 ± 0,80 2,6 ± 0,31 2,9 ± 0,68 2,9 ± 0,35 3,0 ± 1,05 3.0 ± 1.01 3,8 ± 1,15 3,9 ± 1,12 3,9 ± 1,05
7. М. свинка 3 - 0,1 ± 0,01 1,2 ± 0,3 1,6 ± 0,03 1,9 ± 0,2 1,1 ± 0,30 1,3 ± 0,9 1,3 ± 0,12 1,8 ± 0,75 1,9 ± 0,90 1,9 ± 0,85 2,0 ± 0,64 2,6 ± 1,01 2,6 ± 1,00 2,7 ± 0,45
8. Белая крыса 3 0,3 ± 0,1 0,9 ± 0,05 1,0 ± 0,04 2,8 ± 0,31 3,6 ± 1,15 5,3 ± 1,36 6,8 ± 2,02 7,5 ± 2,33 8,8 ± 2,14 9.0 ± 3.00 9,2 ± 3,06 9,1 ± 2,95 9,9 ± 2,12 10,0 ± 3,01 10,3 ± 3,05
По мерее срока культивирования клеток показатель фагоцитоза достоверно (Р
Лабораторная оценка нарушений врожденного иммунитета
Функциональная оценка В-лимфоцитов
Определение концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови и других биологических жидкостях является одним из наиболее важных интегральных показателей функциональной полноценности В-лимфоцитов и всей системы регуляции гуморального адаптивного иммунитета.
Традиционно концентрацию сывороточных иммуноглобулинов определяли методом радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини . В настоящее время этот метод все еще находит свое применение, предпочтение отдается моноклональным антителам против отдельных антигенных детерминант (эпитопов), характерных для отдельных классов иммуноглобулинов.
Принцип метода Манчини заключается в том, что образцы исследуемых сывороток помещают в лунки агара, в которых содержатся антитела против IgM, IgG, IgA в стандартной концентрации. Иммуноглобулины, содержащиеся в исследуемой сыворотке, диффундируют в агар и при взаимодействии с соответствующими антителами образуют кольца преципитации. До тех пор, пока в лунке сохраняется избыток антигена, происходит постепенное увеличение диаметра кольца преципитации. Окончательный размер кольца преципитации зависит от концентрации соответствующих иммуноглобулинов. Метод Манчини позволяет определить концентрацию иммуноглобулинов, равную 10 мкг/мл. Ошибка метода составляет 10%.
Для диагностики нарушений врожденного иммунитета обычно определяют фагоцитарную и метаболическую активность нейтрофилов и оценивают состояние системы комплемента.
Наиболее информативными для оценки фагоцитарной системы следует считать фагоцитарный индекс, фагоцитарное число (отражает поглотительную способность нейтрофилов) и индекс бактерицидности (отражает переваривающую способность нейтрофила).
Фагоцитарный индекс (ФИ) – процент клеток, вступивших в фагоцитоз, от общего их числа.
Фагоцитарное число (ФЧ) – среднее число бактерий или частиц латекса, поглощенных в расчете на один нейтрофил.
Также проводятсятесты спонтанного и стимулированного фагоцитоза с использованием частиц латекса. Фагоцитоз с латексом основан на поглощении частиц латекса нейтрофилами (адгезия, захват и полное поглощение).
При проведении спонтанного теста лейкоциты, выделенные из периферической крови, смешивают с суспензией частиц латекса; при проведении теста индуцированного фагоцитоза к полученной смеси добавляют раствор пирогенала. После инкубирования при 37 0 С в течение 30 минут готовят мазки, а затем в фиксированных и окрашенных по Романовскому-Гимзе мазках подсчитывают процент нейтрофилов, поглотивших латекс.
Тест восстановления нитросинего тетразолия –НСТ-тест позволяет оценить метаболическую активность гранулоцитов крови, выявляет резервные возможности внутриклеточных систем фагоцитов. НСТ-тест основан на восстановлении поглощенного лейкоцитами крови растворимого красителя – нитросинего тетразолия в нерастворимый диформазан черного цвета (внутриядерные включения – глыбки диформазана) под влиянием супероксиданиона, образующегося в НАДФ-Н-оксидазной реакции, инициирующей процесс стимуляции фагоцитоза.
Постановка реакции . На обезжиренное предметное стекло наносят 0,02 мл 0,9% раствора хлорида натрия, 0,02 мл нейтрофильной взвеси и 0,02 мл 0,75% раствора НСТ (нитросинего тетразолия).
В качестве нагрузки используют коммерческий липополисахарид грамотрицательных бактерий E. coli или раствор пирогенала (липополисахарид S. typhi) в разведении 1:10. На другое обезжиренное стекло наносят 0,02 мл ЛПС, 0,02 мл нейтрофильной взвеси и 0,02 мл 0,75% раствора НСТ. Помещают во влажную камеру на 30 минут. Готовят мазки, высушивают, фиксируют. Окрашивают 0,1% раствором нейтрального красного. Учитывают нейтрофилы, высчитывая процент лейкоцитов с гранулами восстановленного НСТ (диформазан черного цвета).
4.4.6 Определение фагоцитарной активности клеток крови
Принцип метода. Метод основан на явлении фагоцитоза – реакции организма, проявляющейся в способности клеток-фагоцитов захватывать и переваривать чужеродные микроорганизмы.
Реактивы: 1. Стабилизатор крови.
2. Взвесь суточной микробной культуры (0,5-1 млрд.м.к./мл) в физрастворе.
Ход определения. В стерильные центрифужные пробирки наливают по 0,5 мл стабилизированной исследуемой крови и 0,5 мл микробной взвеси, содержащей по оптическому стандарту мутности 0,5-1 млрд. микробных клеток в 1 мл.
В зависимости от задач и целей исследований в работе могут быть ис-пользованы различные виды живых или убитых микроорганизмов: ки-шечная палочка, стафилококк, стрептококк и т.п.
Пробирку с приготовленной смесью осторожно встряхивают, поме-щают на 30 мин в термостат или водяную баню, отрегулированную на 37°С. По истечении указанного срока из смеси делают 3-5 мазков (по спо-собу приготовления мазков крови), фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимзе.
Расчет: Фагоцитарная активность лейкоцитов. Фагоцитарная ак-тивность выражается процентом активных лейкоцитов (фагоцитов) в об-щем числе подсчитанных нейтрофильных лейкоцитов. Из числа подсчи-танных 100 нейтрофилов выводится их процентное соотношение, т. е. лей-кограмма. По найденным 100 фагоцитам определяют число клеток, участ-вующих в фагоцитозе (захвативших определенное количество микробов). Полученный результат выражают в процентах.
Фагоцитарный индекс определяется средним числом фагоцитиро-ванных микробов, приходящихся на один активный лейкоцит. Этот пока-затель характеризует интенсивность фагоцитоза. Для определения фагоци-тарного индекса используют те же мазки крови, по которым определялась фагоцитарная активность лейкоцитов. В препаратах, приготовленных опи-санным выше способом, подсчитывают не менее 100 лейкоцитов и количе-ство поглощенных ими микробных тел. Вычисляется фагоцитарный индекс путем деления числа фагоцитированных бактерий на число активных лей-коцитов.
Фагоцитарное число является дополнительным показателем, харак-теризующим как агрессивность нейтрофилов, так и их активность. Вычис-ляется фагоцитарное число путем деления числа фагоцитированных бакте-рий на общее число подсчитанных лейкоцитов.
Фагоцитарная емкость определяется количеством микробных кле-ток, фагоцитированных лейкоцитами в 1 мм3 крови. Этот показатель ха-рактеризует общую фагоцитарную активность крови и зависит от количе-ства лейкоцитов, содержащихся в I мм3. Некоторые авторы этот показатель называют фагоцитарной интенсивностью, абсолютным фагоцитозом или общим фагоцитозом. Вычисляется фагоцитарная емкость умножением фа-гоцитарного числа на количество лейкоцитов в 1 мм3 крови.
При высокой функциональной активности фагоцитов процесс перева-ривания захваченных микробов начинается немедленно, и уже в первые 30 мин. отмечают не только визуальное изменение микробной клетки, но и преобразование некоторых нейтрофильных лейкоцитов (набухание, изме-нение очертания ядра, слабое прокрашивание и т.д.), т.е. появляются при-знаки, характеризующие автолиз (самораспад) и начало деструкции нейтрофила. В течение 2 ч фагоцитарная реакция в норме заканчивается перевариванием захваченных микробов и разрушением полиморфноядер-ных фагоцитов.
Для количественной оценки переваривающей способности фагоцитов введено понятие индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ), для этого определяют полусумму отношений фагоцитарной активности нейтрофи-лов, полученной через 30 мин. инкубации к фагоцитарной активности нейтрофилов, полученной через 2 ч, и отношения фагоцитарных индексов в эти же сроки. Принято считать, что при ИЗФ 1 и больше реакция счита-ется завершенной, а меньше 1 – незавершенной.
Неспецифическая клеточная защита организма осуществляется лейкоцитами, которые способны к фагоцитозу. Фагоцитоз - это процесс узнавания, захвата и поглощения разных чужеродных с...
Средняя цена в вашем регионе: 4195 от 880 … до 5300
Описание исследования
Подготовка к исследованию: Специальной подготовки не требует, кровь из вены берут с утра, натощак, в пробирки с ЭДТА. Исследуемый материал: Взятие крови
Неспецифическая клеточная защита организма осуществляется лейкоцитами, которые способны к фагоцитозу. Фагоцитоз - это процесс узнавания, захвата и поглощения разных чужеродных структур (разрушенных клеток, бактерий, комплексов антиген-антитело и др.). Клетки, осуществляющие фагоцитоз (нейтрофилы, моноциты, макрофаги), называются общим термином - фагоциты. Фагоциты активно передвигаются и содержат большое количество гранул с различными биологически активными веществами.Фагоцитарную активность лейкоцитов
Метод
Из крови определенным способом получают лейкоцитарную взвесь, которую смешивают с точным количеством лейкоцитов (1млрд микробов в 1 мл). Через 30 и 120 мин готовят мазки из этой смеси и окрашивают по Романовскому-Гимзе. Под микроскопом просматривают около 200 клеток и определяют количество фагоцитов, которые поглотили бактерии, интенсивность их захвата и уничтожения.
1. Фагоцитарный индекс - это процент фагоцитов, поглотивших бактерии через 30 и 120 мин, к общему количеству просмотренных клеток.
2. Фагоцитарный показатель - среднее число бактерий, находящихся в фагоците через 30 и 120 мин (производят математическое деление общего числа поглощенных фагоцитами бактерий на фагоцитарный индекс)
3. Индекс завершенности фагоцитоза - рассчитывается делением числа убитых бактерий в фагоцитах на общее число поглощенных бактерий и умножением на 100.
Референсные значения - норма
(Иммунный статус, фагоцитоз (фагоцитарный индекс, фагоцитарный показатель, индекс завершенности фагоцитоза), кровь)
Информация, касающаяся референсных значений показателей, а также сам состав входящих в анализ показателей может несколько отличаться в зависимости от лаборатории!
Норма:
В норме показатели фагоцитарной активности:
1. Фагоцитарный индекс: через 30 мин - 94,2±1,5, через 120 мин - 92,0±2,5
2. Фагоцитарный показатель: через 30 мин - 11,3±1,0, через 120 мин - 9,8±1,0
Показания
1. Тяжелые, длительные инфекции
2. Проявления любого иммунодефицита
3. Соматические заболевания - цирроз печени, гломерулонефрит - с проявлениями иммунодефицита
Повышение значений (положительный результат)
1. При бактериальных воспалительных процессах (норма)
2. Повышенное содержание лейкоцитов в крови (лейкоцитоз)
3. Аллергические реакции, аутоаллергические заболевания
Понижение значений (отрицательный результат)
Снижение показателей активности фагоцитоза свидетельствует о разных нарушениях в системе неспецифического клеточного иммунитета. Это может быть связано со сниженной продукцией фагоцитов, быстрым их распадом, нарушением подвижности, нарушением самого процесса поглощения инородного анегта, нарушением процессов его уничтожения и др. Все это говорит о снижении устойчивости организма к инфекции.
Чаще всего фагоцитарная активность снижается при:
1. На фоне тяжелых инфекций, интоксикаций, ионизирующего облучения (вторичный иммунодефицит)
2. Системных аутоиммунных заболеваний соединительной ткани (системная красная волчанка, ревматоидный артрит)
3. Первичных иммунодефицитов (синдром Чедиака-Хигаси, хроническая гранулематозная болезнь)
4. Хроническом активном гепатите, циррозе печени
5. Некоторых формах гломерулонефритов
Где сдать анализ
8 лабораторий делают данный анализ в вашем регионе . Чтобы найти ближайшую лабораторию и сравнить цены на анализ - Иммунный статус (фагоцитоз): фагоцитарный индекс, фагоцитарный показатель, (ПРОБИРКА С ЭДТА) индекс завершенности фагоцитоза(ПРОБИРКА С ЭДТА) - нажмите кнопку.
